Сайтын хэсгүүд
Редакторын сонголт:
- Өөрийнхөө гараар хиймэл цэцэг хэрхэн хийх вэ?
- Өөрийнхөө гараар үр тарианы тээрэм хэрхэн хийх вэ?
- DIY сүрэл бутлуурын зураг, видео Гар аргаар хадлан бутлуур хийх арга
- Сүрэл бутлуурыг хэрхэн яаж хийх вэ Өөрийнхөө гараар сүрэл зүсэгчийн зураг
- Катапултыг хэрхэн яаж хийх вэ: гар урлалын энгийн сонголтууд Модоор өөрөө хийдэг катапултыг хэрхэн яаж хийх вэ
- Хайртай дотны хүмүүстээ зориулж "Би чамд хайртай болсон 100 шалтгаан" гэсэн хүсэл бүхий өөрөө хийх сав
- Өргөст хэмхийг задгай талбайд хэрхэн уях эсвэл ургуулах вэ?
- Бууцаар био хийн үйлдвэрийг өөрсдийн гараар хийдэг
- Бардамналын нүгэл гэж юу вэ, үүнийг амьдралд хэрхэн шийдвэрлэх вэ?
- Эр хүнээ хэрхэн олох вэ - сэтгэл судлаачийн зөвлөгөө
Зар сурталчилгаа
| Амьдрал муухай. Тунхууны пероксидазыг үйлдвэрлэх арга Тунхууны пероксидазын ферментийн хэрэглээ |
II. Уран зохиолын тойм. БҮЛЭГ 1. УРИАЛ БОЛОН РЕКБИНАНТ ХЭРЭГСИДИЙН БҮТЭЦ, ҮЙЛ АЖИЛЛАГААНЫ МЕХАНИЗМ, ШИНЭ ХЭРЭГЛЭЭ. 1.1. Оршил. 1.2. Пероксидазын болор бүтэц. 1.3. Пероксидазын хүчил-суурь катализ. 1.4. Металл холбох газрууд. 1.5. HRP идэвхтэй төвийн архитектур. 1.5.1 HRP-ийн алслагдсан хэсгийн бүтэц, устөрөгчийн бондын систем. 1.5.2. HRP-ийн проксимал бүсийн бүтэц ба устөрөгчийн бондын систем. 1.5.3. Үнэрт субстратыг холбох газар. 1.6. Пероксидазын катализ дахь уургийн орчны үүрэг. Бүлэг 2. ПЕРоксидазын БИОТЕХНОЛОГИЙН ХЭРЭГЛЭЭ. 2.1 Душуноферментийн шинжилгээнд пероксидазын хэрэглээ. 2.2. Физиологийн идэвхт бодисын биохимийн шинжилгээ. 2.3. Биосенсор дахь пероксидазын хэрэглээ. 2.4. Пероксидазын биотрансформацид хэрэглэх. 2.5. Целлюлоз, цаасны үйлдвэрт био цайруулахад пероксидазын хэрэглээ. 3-р бүлэг ОРУУЛАЛТЫН БИЕД ДАХЬ савханцарын ЭСҮҮДЭД ИЛЭРХИЙЛЭГДСЭН ЭУКАРИОТ УУРГЫН ДИСУЛФИДИЙН БОНДЫН. III. ТУРШИЛТЫН ХЭСЭГ. БҮЛЭГ 4. МАТЕРИАЛ БА АРГАЧЛАЛ. 4.1. Урвалж бодис. 4.2. Судалгааны аргууд. 4.2.1 HRP-ийн рекомбинант хэлбэрийг клонжуулах. 4.2.2 BPFA-тай HRP-ийн рекомбинант коньюгат авах. 4.2.3 E. coli эс дэх рекомбинант HRP-ийн илэрхийлэл. 4.2.4 Рекомбинант HRP-ийг дахин нугалах, цэвэршүүлэх протокол. 4.2.5 HRP-ийн рекомбинант хэлбэрийн физик-химийн шинж чанар. 4.2.6 Адсорбци ба цахилгаан химийн хэмжилт. 4.2.7 Тунхууны пероксидазын мутант хэлбэрийн бүтцийн өөрчлөлтийн тооцоо. IV. ҮР ДҮН, ТҮҮНИЙ ХЭЛЭЛЦҮҮЛЭГ. Бүлэг 5. РЕкомбинант морины хэт исэлдүүлэгчийн илэрхийлэл. E.coli ЭСҮҮД ДАХЬ: ИЛЭРХИЙЛЭХ, ДАХИН ЭВГЭЭХ, ДАХИН ИДЭВХЖҮҮЛЭХ, ЦЭВЭРҮҮЛЭХ СИСТЕМИЙГ ОНОВЧЛУУЛАХ. 5.1. E. coli BL21(DE3) эсийн периплазмын бүсэд HRP-ийн илэрхийлэл. 5.2. E. coli BL21(DE3)pLysS эсүүдийн цитоплазмын бүсэд илэрхийлэгдэх үед оруулах биетүүдээс HRP дахин нугалах системийг оновчтой болгох. 5.3. С төгсгөл дэх рекомбинант PCS 6xHis-ийн шинж чанарууд. 5.4. HRP-ийн мутант хэлбэрийг олж авах, шинж чанар. Бүлэг 6. ҮНДЭСЛЭН АМПЕРОМЕТРИЙН МЭДРЭГЧ РЕкомбинант HRP хэлбэрүүд. 6.1 H2O2-ийн амперометрийн тодорхойлолт. 6.2 Биосенсорын дохионы тогтвортой байдал. 6.3 Биферментийн биосенсорыг хөгжүүлэх. БҮЛЭГ 7. РЕКОМБИНАНТИЙН КОНЮГАТЫН БЭЛТГЭЛ ба шинж чанарууд BPFA ТЭМДЭГТЭЙ ХОРСЕРАДИЙН ХЭТ оксидаз. 7.1 E. coli эсүүд дэх рекомбинант HRP-PAFA коньюгатыг клончлох, илэрхийлэх. 7.2 Рекомбинант HRP-BPFA коньюгатуудын физик-химийн болон дархлаа судлалын шинж чанарууд. V. ДҮГНЭЛТ Зөвлөмж болгож буй диссертацийн жагсаалт
Дипломын ажлын танилцуулга (конспектийн хэсэг) "Рекомбинант тунхууны пероксидазын олж авах, шинж чанар, хэрэглээ" сэдвээрТунхууны пероксидазын изофермент С (EC 1.11.1.7) нь гликопротейн, молекул жинтэй, 44 кДа, ургамлын пероксидазын дээд овогт багтдаг, протопорфирин-IX протезийн бүлэг, хоёр Са2+ ион агуулдаг. HRP нь олон тооны органик болон органик бус субстратын нэг электрон исэлдэлтийг устөрөгчийн хэт исэлтэй хурдасгадаг. HRP нь аналитик биохими, биотехнологид эсрэгбие, ДНХ, бага молекул жинтэй нэгдлүүдийн (аналит) маркер болох өргөн хэрэглээг олж авсан. Сүүлийн жилүүдэд HRP генийн клончлол, гетерологийн илэрхийлэлд гарсан ахиц дэвшил нь уургийн инженерчлэлийн аргыг ашиглан бүтцийн болон функциональ харилцааг судлах шинэ боломжийг нээж байна. Рекомбинант HRP авахын тулд E. coli эсүүд дэх экспрессийн систем нь өргөн тархалтыг олсон. Шавжны эсийн илэрхийлэл, ферментийг идэвхтэй, уусдаг, гликозилжсэн хэлбэрээр олж авах, мөөгөнцрийн илэрхийлэл гэх мэт бусад илэрхийлэх хэлбэрүүд байдаг. Гэсэн хэдий ч эдгээр экспрессийн системүүд нь нэлээд үнэтэй бөгөөд хөдөлмөр их шаарддаг бөгөөд үүнээс гадна шавьжны эсийн экспрессийн системийг өргөжүүлэх боломжгүй тул E. coli эсүүд дэх илэрхийлэл шиг тийм өргөн тархалтыг олж чадаагүй байна. Рекомбинант HRP нь уусдаггүй, идэвхгүй хэлбэрээр E. coli эсүүдэд агуулагдах биед илэрдэг. Протезийн бүлэгт апо-пероксидазыг дахин нугалах, идэвхжүүлэх үйл явц нь олон үе шаттай бөгөөд нэлээд хөдөлмөр шаарддаг. Жишээлбэл, биосенсорт ашиглах зэрэг хэрэглээний хувьд рекомбинант HRP-ийг олж авах илүү үр дүнтэй, найдвартай арга шаардлагатай. Тиймээс энэ ажлын гол зорилтуудын нэг нь рекомбинант HRP-ийг дахин нугалах, дахин идэвхжүүлэх, цэвэршүүлэхийн тулд өмнө нь тайлбарласан протоколуудыг оновчтой болгох арга замыг хайж олох, мөн уусдаг, идэвхтэй ферментийг олж авахын тулд периплазмын экспрессийн боломжийг судлах явдал байв. Устөрөгчийн хэт ислийг багасгах урвал дахь HRP-ийн катализаторын өндөр идэвхжил нь пероксидазыг электрод, ферментийн идэвхтэй хэсэг, субстрат хоорондын шууд электрон дамжуулалтад оролцдог өндөр үр ашигтай биоэлектрокаталист болгон ашиглах боломжийг олгодог. Субстрат байгаа тохиолдолд электродын тодорхой потенциалтай үед хэмжсэн бууралтын гүйдэл ба H2O2 концентрацийн хооронд пропорциональ байдал ажиглагддаг. Энэ тохиолдолд шууд (зуучлагчгүй электрон дамжуулалтын) үр ашиг нь HRP дээр суурилсан амперометрийн биосенсорын системийг хөгжүүлэх хамгийн чухал нөхцлүүдийн нэг юм. Дээр дурдсан бүхнээс үзэхэд энэхүү ажлын дараахь зорилго нь органик HRP-ийн гадаргуугийн рекомбинант HRP-ийн гадаргууг функциональ бүлгүүдээр чиглэсэн мутагенезаар өөрчлөх замаар HRP молекулыг электродын гадаргуу дээр үр дүнтэй чиглэсэн хөдөлгөөнгүй болгох явдал юм. Энэхүү ажилд HRP-ийн гадаргуугийн бүсэд богино олигохистидины дарааллыг нэвтрүүлэх стратегийг санал болгосон бөгөөд энэ нь нэг талаас металл хелатын хроматографи (Ni-NTA агароз) ашиглан рекомбинант ферментийг үр дүнтэй цэвэршүүлэх ёстой. цаг хугацаа нь гадаргуу дээр харгалзах мутантуудыг үр ашигтай шингээхэд хувь нэмэр оруулдаг.алтны электродууд (гистидин нь алтанд эргэлт буцалтгүй шингэдэг гэдгийг мэддэг). Тунхууны пероксидаза нь иммуноферментийн шинжилгээнд маркер фермент болгон өргөн хэрэглээг олсон. Уураг ба гаптенуудын химийн нэгдэл нь ферментийн хэсэгчилсэн идэвхгүй байдал, коньюгат гетероген байдалд хүргэдэг бөгөөд энэ нь шинжилгээний өвөрмөц байдал, мэдрэмжинд нөлөөлдөг. Генийн инженерчлэлийг хөгжүүлснээр эсрэгбие ба уургийн эсрэгтөрөгчтэй маркер ферментийн рекомбинант коньюгатуудыг бий болгох боломжтой болсон. Ийм коньюгатууд нь химийн аргаар бэлтгэгдсэнтэй харьцуулахад хэд хэдэн давуу талтай, ялангуяа тэдгээр нь нэг төрлийн найрлагатай, 1: 1 стехиометртэй, дахин үржих чадвартай байдаг. Үүнээс гадна рекомбинант коньюгатууд нь ферментийн болон дархлаа судлалын үйл ажиллагааг 100% хадгалж байдаг. E. coli эсэд HRP-ийн гетерологийн илэрхийлэлд сүүлийн үеийн дэвшилтүүд болон рекомбинант тунхууны пероксидазыг дахин идэвхжүүлснээр маркер фермент болгон пероксидазтай рекомбинант коньюгатуудыг авч, ферментийн дархлааны шинжилгээнд ашиглах боломжтой болсон. Ажлын энэ үе шатны зорилго нь хүний зүрхний төрлийн тосны хүчлийг холбогч уураг (FABP) бүхий тунхууны пероксидазын рекомбинант коньюгатыг олж авах явдал байв. BPFA нь миокардийн шигдээсийн шинэ өвөрмөц шинж тэмдэг юм. BPFA-тай HRP-ийн рекомбинант коньюгатыг олж авснаар миокардийн шигдээсийг оношлох шинэ экспресс системийг бий болгох боломжтой болно. II. Уран зохиолын тойм Үүнтэй төстэй дипломууд "Биотехнологи" мэргэжлээр, 03.00.23 VAK код
Диссертацийн дүгнэлт сэдвээр "Биотехнологи", Григоренко, Виталий Георгиевич1. E. coli омгийн BL21(DE3) эсийн реплазмд рекомбинант тунхууны пероксидазыг pETpelHRPhis экспрессийн вектороор илэрхийлэхэд уусдаг, функциональ идэвхтэй фермент үүснэ, 1 литр эсийн өсгөвөрт 0.5 мг орчим уургийн нийт гарц гарна. . 2. E. coli омгийн BL21(DE3)pLysS-ийн рекомбинант HRP-ийг pETHRPhis илэрхийллийн вектортой илэрхийлэх цитоплазмын систем нь HRP-ийн экспрессийн өндөр түвшинг агуулсан биет хэлбэрээр (зорилтот бүтээгдэхүүн нь нийт 30 орчим хувийг эзэлдэг) хангадаг. эсийн эсийн уураг). HRP-ийн C-терминал бүсэд гексахистидины дарааллыг (6xHis) нэвтрүүлснээр рекомбинант ферментийн бэлдмэлийг тусгаарлах, цэвэршүүлэхэд үр дүнтэй металл хелатын хроматографи хийх боломжийг олгосон. 3. Төрөл бүрийн урвалжууд (мочевин, имидазол, глутатион,.)-ийн HRP-ийн шинж чанарт үзүүлэх нөлөөллийн талаарх мэдээлэлд үндэслэн нэгдлийн биеэс рекомбинант HRP-ийг дахин нугалах, идэвхжүүлэх шинэ схемийг боловсруулсан нь идэвхтэй холо-фермент, 1 литр E.coli өсгөвөрөөс 8-10 мг гарцтай. 4. Ферментийн N ба С төгсгөлийн бүсэд гексахистидины дарааллыг нэвтрүүлэх, түүнчлэн дотоод гадаргуугийн хоёр бүсийн (57-61) болон (211-216) амин хүчлийн үлдэгдлийг орлуулах нь батлагдсан. Гистидинтэй хамт газар руу чиглэсэн мутагенез нь рекомбинант HRP-ийн катализаторын шинж чанарт нөлөөлдөг. 5. HRP-ийн рекомбинант хэлбэрүүдээр өөрчлөгдсөн алтны электродууд нь алтны гадаргуу ба ферментийн идэвхтэй хэсгийн хооронд шууд электрон дамжуулалтыг үр дүнтэй хийснээр H2O2 биоэлектрокаталитик бууралтын өндөр, тогтвортой амперометрийн дохиог харуулдаг бөгөөд энэ нь бүх нийтийн мэдрэгчийг бий болгох үндэс суурь болдог. H2O2, түүнчлэн HRP болон харгалзах H2O2 үүсгэгч оксидаз (лизин оксидаза, глюкозын оксидаза,.) -ийг хамтран хөдөлгөөнгүй болгоход суурилсан бифермент мэдрэгчийг бий болгоход зориулагдсан. 6. Тунхууны пероксидазын рекомбинант коньюгат нь хүний зүрхний өөхний хүчлийн дамжуулагч уураг (HFFA) нь HRP-ийн каталитик шинж чанар ба FAFA-ийн иммуноген шинж чанартай байдаг нь ферментийн дархлааны шинжилгээнд ашиглах боломжийг олгодог. Зорилтот бүтээгдэхүүний гарц нь гэдэсний савханцарын өсгөвөрт 1 литр тутамд 12 мг байв. Диссертацийн судалгааны эх сурвалжуудын жагсаалт химийн шинжлэх ухааны нэр дэвшигч Григоренко, Виталий Георгиевич, 2001 он1. Велиндер, К.Г. (1992) Ургамал, мөөгөнцөр, бактерийн пероксидазын дээд гэр бүл. Карр. Санал. Бүтэц. Биол., 2:388-393. 2 Данфорд, H.B. болон Стиллман, Ж.С. (1976) Пероксидазын үйл ажиллагаа, үйл ажиллагааны механизмын тухай, Зохицуулах химийн тойм, 19, 187-251 3. Англи хэл, A.M., Tsaprailis, G. (1995) Гем пероксидазын каталитик бүтэц-функцын хамаарал. Adv.Inorg. Хими 43:79-125 4. Велиндер, К.Г. Тунхууны гликопротейн пероксидазын ковалент бүтэц (EC1.11.1.7). ФЭБСлетт., 1976. 72: х. 19-25. 5 Данфорд, H.B. Тунхууны пероксидаза: бүтэц ба кинетик шинж чанарууд, хими ба биологийн пероксидазын хувьд, J. Everse, K.E. Эверс, М.Б. Гришам, редакторууд. 1992, ХХЗХ-ны хэвлэл: Бока Ратон, Флорида, х. 1-24. 6. Ким, Б.Б. Писарев, Ю.Ю. Егоров, А.М. Луминолоор дамждаг химилюминесцент шинжилгээний шошго болгон тунхууны болон Arthromyces Ramosus-ийн пероксидазын харьцуулсан судалгаа. Анал.Биохим., 1991. 199: х. 1-6. 7. Чисвелл, Д.Ж. болон Ortlepp S.A. (1989) HRP ферментийн ДНХ-ийн дарааллын кодчилол. Европын патент No EP0299682 8. Ortlepp, S.A., Pollard-Knight, D. and Chiswell, D.J. (1989) Escherichia coli дахь нийлэг тунхууны пероксидазын генээр тодорхойлогдсон уургийн илэрхийлэл ба шинж чанар. J. Biotech., 11, 353-364. 9. Newmyer, S.L., Sun, J., Loehr, T.M., De Montellano P.R.O. Тунхууны пероксидазын His-170->Ala мутант идэвхийг имидазолоор аврах нь: Проксимал лиганд холбохын ач холбогдол. Биохими, 1996.35(39): х. 12788-12795. 10. Newmyer, S.L., De Montellano, P.R.O. Экзоген имидазолоор тунхууны пероксидазын H42A мутант катализаторын идэвхийг аврах. Биологийн химийн сэтгүүл, 1996. 271(25): х. 14891-14896. 11. Танака, М., Ишимори, К., Моришима, I. Тунхууны пероксидазын алслагдсан хэсэгт хүчил-суурь катализатор болох дистал глутамины хүчил. Биохими ба биофизикийн судалгааны холбоо, 1996. 227(2): х. 393-399. 12. Howes, B.D., Rodriguezlopez, J.N., Smith, A.T., Smulevich, G. Тунхууны пероксидазын дистал үлдэгдэл мутаци: субстратын холболт ба хөндийн шинж чанарт үзүүлэх нөлөө. Биохими, 1997.36(6): х. 1532-1543. 13. Holzbaur, I.E., English, A.M., Ismail, A.A. Карбонил тунхууны пероксидазын хэт улаан туяаны спектр ба түүний субстратын цогцолборууд: рН-аас хамааралтай конформеруудын шинж чанар. Америкийн химийн нийгэмлэгийн сэтгүүл, 1996. 118(14): х. 3354-3359. 14. Гилфойл, D.J., Rodriguezlopez, J.N., Smith, A.T. Талбайд чиглэсэн мутагенез ба фенилгидразиныг амиа хорлох субстрат ашиглан тунхууны пероксидазын үнэрт-донортой холбосон газрыг судлах. Европын биохимийн сэтгүүл, 1996. 236(2): х. 714-722. 15. Газарян, И.Г., Галкин, А.Г., Досеева, В.В., Тишков, В.И. Phe41->His ба Phel43->Glu нэг цэгийн мутантуудын үйлдвэрлэл ба катализаторын шинж чанар нь тунхууны пероксидазын E-coli-д илэрхийлэгддэг. Биохими Москва, 1995. 60(10): х. 1187-1192 он. 16. Нагано, С., Танака, М., Ватанабе, Ю., Моришима, I. тунхууны пероксидазын гемийн дистал сайт дахь устөрөгчийн бондын сүлжээ. Биохими ба биофизикийн судалгааны холбоо, 1995.207(1): х. 417-423. 17. Nagano, S., Tanaka, M., Ishimori, K., Watanabe, Y., Morishima, I. Пероксидазын дистал сайтын аспарагин-гистидин хосын каталитик үүрэг. Биохими, 1996. 35(45): х. 14251-14258. 18. Озаки С., Де Монтеллано, П.Р.О. Тунхууны пероксидазын молекулын инженерчлэл: Phe-41 лейцин ба треонины мутантуудын тиоэфирийн сульфоксид ба стиролын эпоксидаци. Америкийн химийн нийгэмлэгийн сэтгүүл, 1995. 117(27): х. 7056-7064. 19. Тарнс Ж.В., Велиндер, К.Г. Ургамлын пероксидазын биохими, молекул, физиологийн тал дээр тунхууны пероксидазын дегликозиляци, Ж.Лобарзевски нар, редакторууд. 1991, Imprimerie Nationale хэвлэсэн: Женев, х. 111-114. 20. Егоров, А.М., Ким, Б.Б., Писарев, Ю.Ю., Капелиуч, Ю.Л., Газарян И.Г. Сайжруулсан химилюминесценцийн урвалын үндсэн ба хэрэглээний талууд. Биолюминесценц ба химилюминесценц: төлөв байдлын тайлан. 1993. Чичестер: Жон Уайли ба хөвгүүд. 21. Banci, L. Пероксидазын бүтцийн шинж чанар. J. Biotechnol., 1997, 53,253-263. 22. Паттерсон, В.Р., Поулос, Т.Л. (1995) Рекомбинант вандуйн цитозол аскорбат пероксидазын болор бүтэц. Биохими, 34: 4331-4341 23. Schuller, D.J., Ban N, Van Huystee, R.B., McPherson, A., Poulos, T.L. (1996) Самрын пероксидазын болор бүтэц. Бүтэц 4:311-321. 24. Gajhede, M., Schuller, D.J., Henriksen, A., Smith, A.T. болон Poulos, T.L. (1997) Тунхууны пероксидаза С-ийн 2.15 А нягтаршилтай болор бүтэц. Байгалийн бүтцийн биологи, 4, 12, 1032-1038. 25. Henriksen, A., Welinder, K.G., Gajhede, M. (1998) 1.9 A нарийвчлалтайгаар цэвэршүүлсэн арвайн үр тарианы пероксидазын бүтэц. Ургамлын пероксидаз нь төвийг сахисан рН-д эргэлт буцалтгүй идэвхгүй болдог. Ж Биол. Chem., 273, 2241-2248. 26. Savenkova, M.I., Newmyer, S.L., Ortiz de Montellano, P.R. Phe41-His мутациар His42-Ala тунхууны пероксидазыг аврах. Орлуулагч катализатор гистидиний инженерчлэл. J Biol Chem. 1996, 271, 24598-24603. 27. Tanaka, M., Ishimori, K., Mukai, M., Kitagawa, T., Morishima, I. тунхууны пероксидазын дистал His42-Glu эсвэл Gin мутантуудын каталитик үйл ажиллагаа ба бүтцийн шинж чанарууд. Биохими, 1997, 36, 9889-9898. 28. Tanaka, M., Nagano, S., Ishimori, K., Morishima, I., (1997) Пероксидазын алслагдсан газар дахь устөрөгчийн бондын сүлжээ: Asn70-Asp тунхууны пероксидазын мутант спектроскопийн шинж чанарууд. Биохими, 36, 9791-9798. 29. Родригес-Лопез, Ж.Н., Смит, А.Т., Торнли, Р.Н.Ф., (1996) Тунхууны пероксидаз дахь Arg38-ийн үүрэг. Субстратыг холбох, катализ хийх чухал үлдэгдэл. Ж Биол. Chem., 271, 4023-4030. 30. Фолкс, Л.К., Кандеас, Л.П. (1997) I nad II пероксидазын нэгдлүүдийн фенолуудтай урвалд орох чадварыг Маркусын тэгшитгэлээр тайлбарлах. FEBS Lett., 412, 305-308. 31. Nie, G.J., Aust, S.D. (1997) Урвуу идэвхгүйжүүлэлтийн үед лигнин пероксидазын спектрийн өөрчлөлт. Биохими, 36, 5113-5119. 32. Smulevich, G. et al. (1994) Резонансын Раман спектроскопи ашиглан тунхууны пероксидазын С ба гурван сайт руу чиглэсэн мутантуудын шинж чанар, F41V, F41W, R38K. Биохими, 33, 7398-7400. 33 Veitch, N.C. & Williams, R.J.P. (1990) Хоёр хэмжээст "H-NMR тунхууны пероксидаза С ба түүний индол-3-пропионы хүчилтэй харилцан үйлчлэл. Eur. J. Biochem., 189, 351-362. 34. Ruzgas T., Gorton L., Emneus J., Marco-Varga G. (1995) Бал чулуу электрод дээрх тунхууны пероксидазын үйл ажиллагааны кинетик загварууд, J. Electroanal. Chem., 391,41-49. 35. Lindgren A., Tanaka M., Ruzgas T., Gorton L., Gazaryan I., Ishimori K., Morishima I. (1999) Тунхууны пероксидазын рекомбинант хэлбэрээр катализлагдсан шууд электрон дамжуулалт: механизмын талаархи ойлголт. Электрохим. Коммун., 1, 171-175. 36. Преснова, Г., Григоренко, В., Егоров, А., Рузгас Т., Линдгрен А., Гортон Л., Борчерс, Т., (2000), Алт дээрх рекомбинант тунхууны пероксидазын шууд гетероген электрон дамжуулалт. Фарадей хэлэлцэх., 116, 281-289 37. Ferapontova, E.E., Grigorenko, V.G., Egorov, A.M., Borchers, T., Ruzgas, T., Gorton L., (2001) Систем дэх шууд электрон дамжуулалтАлт электрод -Рекомбинант тунхууны пероксидаз. Ж.Электроан. Хими. 38. Линдблад, С.; Мосбах, К.; Bulow, L. (1993), Ферментийн дархлааны шинжилгээнд генетикийн хувьд бэлтгэгдсэн ферментийн коньюгатуудын хэрэглээ Биохимийн чиг хандлага. Sc., 8, 279-283. 39. Портман. Т.; Kiessig, S. T. J. (1992) Ферментийн дархлаа судлалын аргууд. Тойм. 40. Ж.Иммунол. Арга, 150, 5-21. 41. Виттковски, А.; Даунерт, С.; Кинди, М.С.; Бачас, L. G. (1993), Генийн инженерчлэгдсэн хайлуулах уураг дээр суурилсан октапептидын ферменттэй холбоотой иммуносорбент шинжилгээ. Анал. Chem., 65, 1147-1151. 42 Шрайбер, А.; Спект, В.; Пелсерс, M. M. A. L.; Glatz, J.F.C.; Борчерс, Т.; Спенер, Ф. (1998) Дархлалын химийн шинжилгээнд стандарт болгон хүний зүрхний төрлийн тосны хүчлийг холбодог рекомбинант уураг. Клин. Хими. Лаб. Мед., 36,283-288. 43. Grigorenko VG, Chubar TA, Kapeliuch YuL, Borchers T, Spener, F. and Egorov, A.M., (1999) Escherichia Coli дахь рекомбинант тунхууны пероксидазын С-ийн функциональ илэрхийлэлд зориулсан шинэ хандлага, Биокатализ ба биотрансформаци, 17, 359-37 . 44. Григоренко, В., Андреева, И., Борчерс, Т., Спенер, Ф., Егоров А.М. Тунхууны пероксидаз бүхий генийн инженерчлэлийн холимог уураг. (2001) Анал.Хими, 73, 11341139. 45. Studier, F.W., Rosenberg, A.H., Dunn, J.J. болон Дубендорф, Ж.В. (1990) Т7 РНХ полимеразыг клонжуулсан генийг шууд илэрхийлэхэд ашиглах. Энзимологийн аргууд, 185, 60-89. 46. George, P. (1953) Пероксидаз ба тунхууны пероксидазтай цитохромоор үүсгэгдсэн устөрөгчийн хэт ислийн хоёр дахь нэгдлийн химийн шинж чанар. Биохимийн сэтгүүл, 54, 267-271. 47 Брэдфорд, М.М. (1976) Аналитик биохими, 72, 248-254 48 Фюрхоп, Ж.-Х. болон Смит, К.М. (1975) Лабораторийн арга. Порфирин ба металлопротейнд (ed. K.M. Smith). Elsevier, Амстердам, хуудас 757-869. 49 Лаэммли, Их Британи (1970) T4 бактериофагийн толгойг угсрах явцад бүтцийн уургийн задрал. Байгаль, 227, 680-685. 50. Hartmann, C., Ortiz de Montellano, P.R. (1992) Бакуловирүсийн илэрхийлэл ба катализаторын идэвхтэй тунхууны пероксидазын шинж чанар. Биохими, биофизикийн архив, 297, 61-72. 51. Morawski B., Lin Z „ Cirino P., Joo H“ Bandara G, Arnold F. H. (2000) Saccharomyces cerevisiae болон Pichiapastoris дахь тунхууны пероксидазын функциональ илэрхийлэл. Уураг. Eng., 13(5), 377-84. 52. Фридман, Р.Б. (1995) Уургийн дисульфидын холбоо үүсэх. Бүтцийн биологийн өнөөгийн үзэл бодол, 5, 85-91. 53. Skerra, A. and Pliickthun, A. (1988) Escherichia coli дахь функциональ иммуноглобулины Fv фрагментийн угсралт. Шинжлэх ухаан, 240, 1038-1041. 54. Le, H.V. and Trotta, P.P. (1991) Escherichia coli-аас ялгарсан рекомбинант уургийг цэвэршүүлэх. Био процессын технологи, 12,163-181. 55. Gillet, D., Ducancel, F., Pradel, E., Leonetti, M., Menez, A. and Boulain, J.C. (1992) E. coli шүлтлэг фосфатаз руу дисульфид агуулсан нейротоксин оруулах: эрлийз нь биологийн идэвхийг хоёуланг нь хадгалдаг. Уургийн инженерчлэл, 5, 273-278. 56. Ouzzine, M., Boyd, A. and Hulmes, D.J. (1996) Escherichia coli дахь хүний идэвхтэй, лизил оксидазын илэрхийлэл. FEBS захидал, 399, 215-219. 57. Березин, И.В., Угарова, Н.Н., Керщенголц, Б.М., Бровко, Л.И.У. (1975) Тунхууны пероксидазын протезийн бүлгийн ферментийн тогтвортой байдалд үзүүлэх нөлөө (орос хэлээр) Биохимиа 40, 297-301 58. Hargrove, M.S., Krzywda, S., Wilkinson, A.J., Dou, Y., Ikeda-Saito, M. and Olson, J.S. (1994) Миоглобины тогтвортой байдал: гемийн уургийн нугалах загвар. Биохими, 33, 11769-11775. 59. Тамс Ж.В. болон Welinder K.G. (1995) Тунхууны пероксидазын бага зэргийн химийн дегликозиляци нь бүрэн идэвхтэй, нэгэн төрлийн ферментийг үүсгэдэг. Аналитик биохими, 228, 48-55 60 Смит, А.Т. Santana, N., Dacey, S., Edwards, M., Bray, R.C., Thorneley, R.N.F. болон Берк, Ж.Ф. (1990) Тунхууны пероксидазын синтетик генийн илэрхийлэл 61. гэдэсний савханцар дахь С ба 2+ бүхий рекомбинант ферментийг нугалах, идэвхжүүлэх. 62. Ca ба гем. Биологийн химийн сэтгүүл, 265, 1335-13343. 63. Howes, B.D., Rodriguez-Lopez, J.N., Smith, A.T. ба Smulevich, G. (1997) Тунхууны пероксидазын алслагдсан үлдэгдлийн мутаци: субстратын холболт ба хөндийн шинж чанарт үзүүлэх нөлөө. Биохими, 36, 1532-1543. 64. Далтон, Д.А., Диаз дель Кастилло, Л., Кан, М.Л., Жойнер, С.Л. болон Чатфилд, Ж.М. (1996) Шар буурцгийн цитозол аскорбат пероксидазын гетерологийн илэрхийлэл ба шинж чанар. Биохими, биофизикийн архив, 328, 1-8. 65. Phelps, C., Antonini, E. (1969) Нүүрстөрөгчийн дутуу исэл-гемийн аппероксидазын хослол. Биохимийн сэтгүүл, 114, 719-724. 66. Рубцова, М.Ю., Ковба, Г.В. болон Егоров, А.М. (1998) Хөдөлгөөнгүй пероксидаз бүхий сүвэрхэг тулгуур дээр суурилсан химилюминесцент биосенсорууд. Биосенсор ба биоэлектроник, 13, 75-85. 67. Накане П.К., Пирс Г.Б. (1967) Эд эсийн эсрэгтөрөгчийг гэрлийн болон электрон микроскопоор нутагшуулах ферментээр тэмдэглэгдсэн эсрэгбие. J. Cell Biol., 33, 307-318. 68. Avrameas S., Uriel J. (1966) Антиген ба эсрэгбиеийг ферментээр тэмдэглэх арга, түүний дархлаажуулалтын хэрэглээ. CR Acad Sci Hebd Seances Acad Sci D. 262, 2543-2545. 69. Майлс Л.Э. (1968) Тэмдэглэгдсэн эсрэгбие ба дархлаа судлалын шинжилгээний систем. Байгаль, 219, 186-189. 70. Engvall E., Perlmann P. (1971) Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). Иммуноглобулины тоон шинжилгээ G. Immunochemistry, 8, 871-874. 71. Frey A., DiGanzio J, Zurakowski D. (1998) Дархлаа судлалын статистикийн тодорхойлсон төгсгөлийн титр тодорхойлох арга. J. Immunol. Арга, 221, 35-41. 72. Farr A.J., Nakane P.K. (1981) Ферментийн эсрэгбие бүхий иммуногистохими: товч тойм. J. Immunol. Арга, 47, 129-144. 73. Ишикава Э., Имагава М., Хашида С., Ёшитаке С., Хамагучи Ю., Уэно Т. (1983) Ферментийн дархлааны шинжилгээ ба иммуногистохимийн будалтанд эсрэгбие ба тэдгээрийн хэсгүүдийн ферментийн шошго. J. Immunoassay, 4, 209-327. 74. Пундир С.С., Кучхал Н.К., Бхаргава А.К. (1998) Шилэн бөмбөлгүүдийг дээр хөдөлгөөнгүй болгосон оксалат оксидаз ба пероксидаз бүхий шээсний оксалатыг тодорхойлох. Биотехнологи. Appl. Биохим., 27, 103-107. 75. Kuhlmann W.D., Pesche P. (1986) Глюкозын оксидазыг гистологийн дархлааны шинжилгээнд фермент-олшруулах хоёр үе шаттай техникээр тэмдэглэсэн: хромоген исэлдэлтийн хоёрдогч системийн фермент болгон коиммобилжүүлсэн тунхууны пероксидаз. Гистохими, 85, 13-17. 76. Trivedi R.C., Rebar L., Berta E., Stong L. (1978) 500 нм-ийн сийвэнгийн шээсний хүчлийн шинэ ферментийн арга. Клин. Chem., 24, 1908-1911. 77. Ternaux J.P., Chamoin M.C. (1994) Ацетилхолиныг сайжруулах химилюминесцент шинжилгээ. Ж.Биолюмин. Хемилюминий., 9, 65-72. 78. Гуо Ж.А., Мо П.С., Ли Г.Х. (1990) Глюкозын оксидаза ба пероксидазыг хөдөлгөөнгүй болгох, ийлдэс дэх глюкозын урсгалын тарилгын шинжилгээнд хэрэглэх. Appl. Биохими. Биотехнолог., 23, 15-24. 79. Elekes O., Moscone D., Venema K., Korf J. (1995) Шээсний хүчил ба глюкозын бага концентрацийг цахилгаан химийн аргаар илрүүлэх хоёр ферментийн реактор. Клин. Чим. Акта., 239, 153-165. 81. Жао Ж., Хенкенс Р.В., Крамблисс А.Л. (1996) Хөдөлгөөнгүй тунхууны пероксидазыг дарангуйлснаар хорт бодисыг зуучлагчгүй амперометрээр тодорхойлох. Биотехнологи. Прог., 12, 703-708. 82. Ruzgas T., Csoregi E., Emneus J., Gorton L., Marko-Varga G. (1996) Пероксидазын өөрчилсөн электродууд: Үндэс ба хэрэглээ. Анал. Чим. Акта, 330, 123-138. 83. Ferri T, Poscia A, Santucci R. (1998) Мембрантай тунхууны пероксидазын шууд электрохими. II хэсэг: Устөрөгчийн хэт ислийг амперометрээр илрүүлэх., 84 Биоэлектрохим. Bioenerg., 45, 221-226. 85. Ван Б, Ли Б, Ван З, Сю Г, Ван К, Донг С (1999) Хүчиллэг орчинд устөрөгчийн хэт ислийг амперометрээр тодорхойлох Сол-гель нимгэн хальсан хөдөлгөөнгүй шар буурцгийн пероксидазын биосенсор. Анал. Chem., 71, 1935-1939. 86. Adam W, Lazarus M, Saha-Moller CR, Weichold O, Hoch U, Haring D, Schreier P (1999) Пероксидазын биотрансформаци. In: Adv Biochem Engineering Biotechnology, Th Scheper, ed, Springer-Verlag, Berlin Heidelberg, 63,73-108. 87. Doerge DR, Divi RL, Churchwell MI (1997) Пероксидазын үүсгэсэн өнгөт гуайаколын исэлдэлтийн бүтээгдэхүүнийг тодорхойлох. Анал. Биохим., 250, 1017. 88. Колонна С., Гаггеро Н., Ричелми С., Паста П. (1999) Пероксидазын хэрэглээний сүүлийн үеийн биотехнологийн хөгжил. Trends Biotechnol., 17, 163-168. 89. Томас Ж.А., Моррис Д.Р., Хагер.ЛП. (1970) Хлоропероксидаза. Пероксид ба галидын цогцолбор үүсэх ба тэдгээрийн галогенжих урвалын механизмтай хамаарал. Ж Биол. Chem., 245, 3129-3142. 90. Dawson J, H, (1988) Гем агуулсан оксигеназ ба пероксидазын бүтэц-функцын хамаарлыг судлах. Шинжлэх ухаан, 240,433-439. 91. Ортиз Де Монтеллано П.Р. (1992) Гемопротейн пероксидазын каталитик цэгүүд. Анн. Илч. Фармакол. Токсикол., 32, 89-107. 92. Ricard J., Job D. (1974) Пероксидазын нөлөөгөөр индол-3-ацетатын задралын урвалын механизм. Зогсоосон урсгал ба бага температурын спектроскопийн судалгаа. евро. J. Biochem., 44, 359-374. 93. Смит А.М., Моррисон В.Л., Миллхэм П.Ж. (1982) Индол-3-цууны хүчлийг пероксидазагаар исэлдүүлэх: буурсан пероксидаз ба супероксид III-ийн нэгдэл нь бүтээгдэхүүн болгон оролцдог. Биохими, 21.4414-4419. 94. Накажима Р., Ямазаки I. (1979) Тунхууны пероксидазаар индол-3-цууны хүчлийн исэлдэлтийн механизм. Ж Биол. Chem., 254, 872-878. 95. Mottley C, Mason RP (1986) Тунхууны пероксидазаар индол цууны хүчлийг исэлдүүлэхэд чөлөөт радикал завсрын бүтээгдэхүүний электрон спин резонансын судалгаа. Ж Биол. Chem., 261, 16860-16864. 96. Дордик Ж.С., Клибанов А.М., Мартелла М.А. (1986) Тунхууны пероксидазын катализаторын гидроксилжилт: механик судалгаа. Биохими, 25, 2946-2951. 97. Kauffmann C., Petersen B.R., Bjerrum M.J. (1999) Coprinus cinereus пероксидаза ба устөрөгчийн хэт исэлээр усан уусмалаас фенолыг ферментийн аргаар зайлуулах. J. Biotechnol., 73, 71-74. 98. Аль-Касим Л., Тейлор К.Э. (1994) Багцын реактор дахь Coprinus macrorhizus-ийн мөөгөнцрийн пероксидазын тусламжтайгаар бохир уснаас сонгосон үнэрт бохирдуулагчийг ферментийн аргаар зайлуулах. J. Chem. Техник. Биотехнолог., 61, 179-182. 99. Сахаров И.Ю., Кастилло Ж.А., Ареза Ж.К., Галаев И.Ю. (2000) Африкийн далдуу модны Elaies guineensis-ийн пероксидазын цэвэршилт ба тогтвортой байдал. Биологийн ялгарал, 9, 125-132. 100. Ferrari R.P., Laurenti E., Trotta F. (1999) Тунхууны пероксидазын катализтай 2,4,6-трихлорфенолыг исэлдүүлэх 4-хлоргүйжүүлэх. Ж Биол. inorg. Chem., 4, 232-237. 101. Kim S.J., Shoda M. (1999) Будагны өнгөгүйжүүлэхэд оролцдог Geotrichum candidum dec 1-ээс шинэ пероксидазын цэвэршүүлэх ба шинж чанар. Appl. Хүрээлэн буй орчин. Микробиол., 65.1029-1035. 102 Петерханс, А.; Мекленбург, М.; Меусдоерффер, Ф.; Mosbach, K. (1987) Антиген-бета-галактозидазын нэгдлүүдийг ашиглан өрсөлдөх чадвартай ферменттэй холбоотой иммуносорбентийн энгийн шинжилгээ. Анал. Биохим., 163, 470-475. 103. Анн. N. Y. Акад. Sc., 646, 125-135. 104. Линдблад, С.; Перссон, М.; Булоу, Л.; Стахл, С.; Mosbach, K. (1987) Генийн нэгдлээс бэлтгэсэн хүний проинсулин-шүлтлэг фосфатазын коньюгатуудыг ашиглан энгийн өрсөлдөх чадвартай ELIS A-ийн загвар. Биохими. Биофиз. Res. Коммун., 149, 607-614. 105 Жиллет, Д.; Эзан, Э.; Ducancel, F., Gaillard, C.; Ардуин, Т.; Истин, М.; Менез, А.; Булин, Ж.-С.; Грогент, Ж.-М. (1993) Хархын пролактин-шүлтлэг фосфатазын рекомбинант илрүүлэгч ашиглан иммуноферментийн шинжилгээ. Анал. Chem., 65, 1779-1784. 106. Льюис, Ж.С.; Daunert, S. (1999) Генетикийн хувьд нийлсэн GFP болон BFP мутантуудыг ашиглан флюресценцийг холбох шинжилгээнд пептидийг давхар илрүүлэх. Анал. Chem., 71.4321-4327. 107. Линдблад, С.; Мосбах, К.; Bulow, L. (1991) Биолюминесцент дархлааны шинжилгээнд ашиглах генетикийн хувьд ууссан уураг А/люцифераза коньюгат бэлтгэх. J. Immunol. Метод, 137, 199-207. 108 Жиллет, Д.; Дюкансел, Ф.; Прадель, Э.; Леонетти, М.; Менез, А.; Boulain, J. C. (1992) E. coli шүлтлэг фосфатаз руу дисульфид агуулсан нейротоксин оруулах: эрлийз нь биологийн идэвхийг хоёуланг нь хадгалдаг. Protein Eng., 5, 273278. 109 Чануссот, С.; Беллангер, Л.; Лигни-Лемэр, С.; Сегуин П.; Менез, А.; Boulain, J. C. (1996) Инсулины дархлааны оношлогоонд зориулсан рекомбинант колориметрийн хайлуулах уургийн инженерчлэл. J. Immunol. Арга, 197, 39-49. 110. Кершбаумер, Р.Ж.; Хиршл, С.; Швагер, С.; Ибл, М.; Himmler, G. (1996) pDAP2: шүлтлэг фосфатазын хайлуулах уураг үүсгэх вектор. Immunotechnology, 2, 145-150. 111 Карлссон, Р.; Майклсон, А.; Mattsson, L. (1991) Шинэ биосенсорт суурилсан аналитик системтэй моноклональ эсрэгбие-эсрэгтөрөгчийн харилцан үйлчлэлийн кинетик шинжилгээ. J. Immunol. Арга, 145, 229-240. 112. A.M. Егоров, Е.М. Гаврилова, И.Ю. Сахаров (2000) Орчин үеийн биотехнологи дахь пероксидазын хэрэглээ, Ургамлын нэгдсэн системд, H. Greppin et al., edits. Женевийн их сургууль, х. 1-18 113. Krueger, J.K., Stock, A.M., Schutt, C.E., Stock, J.B. 1990. E. coli-д өндөр түвшинд үйлдвэрлэсэн уургийн биетүүд, х. 136-142. БИ БОЛ. Gierasch, J. King (eds.), Protein folding, American Association for Advances in Science, Washington. 114 Marston, F.A.O. 1986. E. coli-д нийлэгжсэн эукариот полипептидүүдийг цэвэршүүлэх. Биохими. Ж. 240: 1-12. 115. Mitraki, A., King, J. 1989. Уураг нугалах завсрын бүтээгдэхүүн ба оруулгатай бие үүсэх. Био/технологи. 7:690-697. 116 Schein, C.H. 1989. Бактерийн уусдаг рекомбинант уургийн үйлдвэрлэл. Био/технологи. 7:1141-1147. 117. Taylor, G., Hoare, M., Gray, D.R., Marston, F.A.O. 1986. Уургийн орцын биетүүдийн хэмжээ ба нягт. Био/технологи. 4:553-557. 118. Анфмсен, Ц.Б. 1973. Уургийн гинжийг нугалах зарчим. Шинжлэх ухаан 181:223-230. 119. Achareya, A.S., Taniuchi, H. 1982. Лизоцимийн дисульфидын завсрын бүтээгдэхүүний бүтэц, тогтвортой байдлын үр нөлөө нь нөхөн төлжих механизмд. Мол. эс. Биохими. 44:129-148. 120. Грейтон, Т.Э. 1986. Уургийн нугалах замын датчик хэлбэрээр дисульфидын холбоо, х. 83-106. Үүнд: C.W.H. Хирс (ред.), Methods in Enzymology, боть. 131 академийн хэвлэл, Нью-Йорк. 121. Грейтон, Т.Э. 1990 Уураг нугалах. Биохими. Ж. 270: 1-16. 122. Фредман, Р.Б., Хиллсон, Д.А. 1980. Дисульфидын холбоо үүсэх, х. 157-212. Үүнд: R.B. Freedman болон H.C. Hawkins (eds.), Уургийн орчуулгын дараах өөрчлөлтийн энзимологи, боть. 1. Лондонгийн академийн хэвлэл. 123. Gierasch, L.M., King, J. 1990. Protein folding. Америкийн шинжлэх ухааны дэвшлийн нийгэмлэг, Вашингтон. 124. Harrison, S.C., Durbin, R. 1985. Полипептидийн гинжийг нугалах нэг зам байдаг уу? Прок. Натл. Акад. шинжлэх ухаан. АНУ 82: 4028-4030. 125. Jaenicke, R. 1988. Уураг нугалах код байдаг уу?, х. 16-36. Үүнд: R. Huber болон E.L. Winnaker (eds.), Уургийн бүтэц ба уургийн инженерчлэл, боть. 39. Спрингер-Верлаг, Берлин. 126. Jaenicke, R. 1991. Protein folding: local structure, domains and assemblies, pp. 387-396. Үүнд: I. Jornvall and G. Gustavsson (eds.), Methods ион уургийн дарааллын шинжилгээ. Биркхаузер Верлаг, Базель. 127. Jaenicke, R. 1991. Protein folding: local structure, domains, subunits and assemblies. Биохими 30: 3147-3161. 128. King, J. 1986. Уургийн нугалах замын генетикийн шинжилгээ. Био/технологи. 4:297-303. 130. Ким, П.С., Балдвин, Р.Л. 1982. Жижиг уургийн нугалах урвалын өвөрмөц завсрын бүтээгдэхүүн ба уургийн нугалах механизм. Анн. Илч. Биохими. 51: 459-489.144145146147148149150,151.152.153.154.155.156.157. 131. Ахмед, А.К., Шаффер, С.В., Ветлауфер, Д.Б. 1975. Үхрийн нойр булчирхайн бууруулсан рибонуклеазыг агаарт исэлдүүлэх, глутатион исэлдүүлэх буферээр ферментийн бус дахин идэвхжүүлэх. Ж Биол. Хими. 250: 8477-8482. 132. Саксена, В.П., Ветлауфер, Д.Б. 1970. Уургийн гурван хэмжээст бүтэц үүсэх. Биохими 9: 5015-5022. 133. Odorzynski, T.W., Light, A. 1979. Үхрийн трипсиноген ба глутатионын холимог дисульфидын дахин нугалах. Ж Биол. Хими. 254:4291-4295. Андерсон, В.Л., Ветлауфер, Д.Б. 1976. Лизоцимийн бууралтын нугалах зам. Ж Биол. Хими. 251:3147-3153. 134. Grigorenko V, Andreeva I, Borchers T, Spener F, Egorov A. Өрсөлдөөнт дархлааны шинжилгээнд ашиглах маркер фермент болох тунхууны пероксидаз бүхий генетикийн инженерчлэлийн хайлуулах уураг. Анал хим. 2001 оны гуравдугаар сарын 15; 73(6), 1134-9. Дээр дурдсан шинжлэх ухааны бичвэрүүдийг хянан үзэхээр нийтэлж, диссертацийн эх бичвэрийг таних (OCR) ашиглан олж авсан болохыг анхаарна уу. Үүнтэй холбогдуулан тэдгээр нь таних алгоритмын төгс бус байдалтай холбоотой алдааг агуулж болно. Бидний хүргэж буй диссертаци, хураангуйн PDF файлд ийм алдаа байхгүй. Энэ арга нь соёолсон тунхууны үндсийг нунтаглаж, нэгэн төрлийн болгох, тунхууны үндэсийн нэгэн төрлийн бодисыг 0.15±0.01 М натрийн хлоридын уусмалаар гарган авах явдал юм. Тогтворжуулагчийн уургуудыг ялгаж, пероксидазыг 45-48% ханасан аммонийн сульфатын давс, 85-90% ханалттай тунадасжуулна. Пероксидазын уусмалын гель шүүлтүүрийг Sephadex G-100 дээр 0.15-0.2 М натрийн хлоридын уусмалаар цэвэрлэнэ. Хроматографийн цэвэрлэгээг карбоксиметил целлюлоз дээр хийдэг. Зорилтот пероксидазын хөлдөөх хатаах ажлыг гүйцэтгэдэг. Диализийг рН 4.4-5.0 натрийн ацетат буфер, рН 8.0±0.1 калийн фосфатын буферийн эсрэг хийнэ. Концентрацийг DEAE-целлюлоз дээр ижил буфертэй уусмалаар дахин цэвэршүүлж, дараа нь ионгүйжүүлсэн усны эсрэг диализ хийнэ. Энэ арга нь өндөр өвөрмөц үйл ажиллагаа, өндөр ургац бүхий пероксидазыг авах боломжийг олгодог. Пероксидазын гаралт тунхууны үндэс 2.52-3.50 г/кг, өвөрмөц идэвхжил нь 640-700 EA/мг уураг байна. 5 z.p. f-ly, 2 өвчтэй, 1 таб. RF-ийн патентын зураг 2353652 Энэхүү шинэ бүтээл нь биотехнологийн салбарт, тухайлбал, ургамлын гаралтай түүхий эдээс фермент үйлдвэрлэхтэй холбоотой бөгөөд ферментийн дархлаа судлалын коньюгатуудын үндсэн бүрэлдэхүүн хэсэг болох дархлаа судлал, иммунохими зэрэгт тунхууны үндэснээс пероксидазын ферментийг лабораторийн болон үйлдвэрийн үйлдвэрлэлд ашиглаж болно. Тунхууны үндэснээс пероксидазыг олж авах янз бүрийн аргыг мэддэг. Тунхууны үндэснээс пероксидаз үүсгэх алдартай арга, үүнд тунхууны үндсийг нэгэн төрлийн болгох, ферментийг давсны уусмалаар гаргаж авах, ферментийг аммонийн сульфатын давсаар тунадасжуулах, гель шүүх, спиртийн тунадасжуулах, электрофорез, аммонийн хлоридоор тунадасжуулах, Sephadex G-ээр шүүнэ. 50 ба DEAE-целлюлоз ба диализ. Энэ аргын гол сул тал нь олж авсан бүтээгдэхүүний бага идэвхжил, цэвэр байдал, түүнчлэн үйлдвэрлэлийн нарийн төвөгтэй байдал, олон тооны технологийн процессын үе шатууд юм. Мөн тунхууны үндэснээс пероксидаз үүсгэх арга байдаг бөгөөд үүнд тунхууны үндсийг нэгэн төрлийн болгож, дараа нь ферментийг усаар ялгаж, пероксидазыг аммонийн сульфатын давсаар тунадасжуулж, дараа нь гель шүүлтүүрээр шүүдэг [US Pat. Унгар 172872, C07G 7/022]. Энэ аргын сул тал нь бага гарц, ферментийн цэвэршилт багатай байдаг. Мэдэгдэж буй арга [A.S. Болгар 46675, C12N 9/08, 15.02.90], үүний дагуу тунхууны үндсийг 2-3 хоногийн турш соёолж, дараа нь нэгэн төрлийн болгож, ферментийг нэг өдрийн турш усаар гаргаж авдаг. Усан хандыг центрифуг хийж, дараа нь аммонийн сульфатын давсаар уураг фракцалж, дараа нь ферментийн аммонийн сульфатын тунадасыг нэрмэл усанд уусгаж, Milipor PTGC 000 05 шүүлтүүр дээр хэт шүүлтүүрт оруулна.0.5 М фосфатын буфер (H8) нэмнэ. үүссэн шүүгдсийг шүүлтийн 1 хэсэг тутамд 100 хэсэг буферийн харьцаагаар DEAE-Sephadex A-50 ион солилцуураар дамжуулж, дараа нь Milipor PTGC 000 05, RTNK 000 05, PTGC 000 05 дээр хэт шүүлтүүрээр шүүнэ. хөлдөөж хатаахад . Энэ аргын сул тал нь пероксидазын өндөр ургац, өндөр хөдөлмөрийн эрчимжилт, үйл явцын үргэлжлэх хугацаа юм. Хамгийн ойрын зам нь [АНУ-ын Пат. RF 2130070, C12N 9/08, 10.05.1999], үүнд усаар угаасан тунхууны үндсийг хандлах уусмал болгон ашигладаг хүнсний аскорбины хүчлийн 0.25% -ийн уусмалын дэргэд массын 1/3-аар цэвэрлэнэ. Цэвэршүүлсэн бодисоос пероксидазыг аскорбины хүчлийн 0.25% уусмалаар 1 цагийн турш гаргаж аваад дараа нь шүүж, центрифуг хийнэ. 5% натрийн сульфитийг дээд давхаргын найрлагад нэмж, ферментийг "боловсорч гүйцэхийн" тулд тасалгааны температурт 24 цагийн турш байлгана. "боловсорч гүйцсэн" ферментийн уусмал нь 40 кДа-аас бага нүхний диаметртэй шүүлтүүр бүхий хэт шүүлтүүр бүхий шилэн төхөөрөмж дээр төвлөрдөг. Аммонийн сульфатыг 85-90% -ийн эцсийн ханасан хүртэл 10 удаа баяжуулсан уусмалд нэмж, центрифуг хийж, тунадасыг арав дахин их хэмжээний нэрмэл усанд уусгаж Sephadex G-25 дүүргэсэн багананд түрхэж, уусмалаар цэвэрлэнэ. бид нэрмэл ус. R Z >0.1-тэй пероксидаза агуулсан фракцуудыг цуглуул. Цуглуулсан фракцуудад аммонийн сульфат нэмж, 85-90% ханасан, центрифуг хийж, тунадасыг 3 дахин нэрмэл усанд уусгаж, Sephadex G-50 дүүргэсэн гель шүүлтүүрийн баганад түрхэж, уусмалаар цэвэрлэнэ. бид нэрмэл ус. R Z >0.5 утгатай пероксидаза агуулсан фракцуудыг цуглуул. Фракцуудыг хольж, рН 4.4 хүртэл цэгцэлж, карбоксиметил целлюлоз дээр цэвэршүүлж, ферментийг 5 мм-ээс 0.15 М ацетат буфер (рН 4.4) (V=S-500 мл, R-500 мл) концентрацийн градиентээр ялгаруулна. . R Z утга >2.7, ферментийн концентраци 10 мг/мл-ээс багагүй фракцуудыг цуглуулна. Бутархай хэсгүүдийг нэгтгэж, рН 5.0 хүртэл титрлээд хөлдөөж хатаана. Энэ аргын сул тал нь хангалтгүй өндөр цэвэршилт, идэвхжил, пероксидазын бага гарц юм. Энэхүү шинэ бүтээл нь тунхууны үндэснээс пероксидазыг үйлдвэрлэх үйлдвэрлэлийн аргыг бий болгох асуудлыг шийдэж, өндөр цэвэршилттэй, өндөр өвөрмөц идэвхжилтэй, өндөр ургацтай пероксидазыг авах боломжтой болгодог. Тунхууны үндэснээс пероксидазын ферментийг олж авах арга, үүнд соёолсон тунхууны үндсийг нунтаглах, нэгэн төрлийн болгох, тунхууны үндсийг нэгэн төрлийн болгох, тогтворжуулагчийн уураг ялгах, пероксидазыг аммонийн сульфатын давсаар тунадасжуулах, пероксидазын гель шүүх зэрэг орно. Sephadex дээр уусмал, карбоксиметил целлюлоз дээр хроматографийн аргаар цэвэршүүлэх, зорилтот пероксидазыг хөлдөөж хатаах, харин буталсан тунхууны үндсийг 0.15±0.01 М натрийн хлоридын уусмалаар рН=4.4±0.2; Пероксидазын уусмалын гель шүүлтүүрийг Sephadex G-100 дээр 0.15-0.2 М натрийн хлоридын уусмалаар рН 4.4-5.0, диализийг рН 4.4-5.0 натрийн ацетат буфер, рН ±8.0 калийн фосфатын буферийн эсрэг диализ хийнэ. 0.1 ба концентраци ба DEAE-целлюлоз дээр ижил буферээр шүүж, дараа нь ионгүйжүүлсэн усны эсрэг диализ хийнэ. Аммонийн сульфатын давстай уургийн тунадасыг хоёр удаа хэрэглэдэг: 45-48% ханалт нь тогтворжуулагчийн уургийг ялгахад, 85-90% ханалт нь пероксидазыг тунадасжуулахад ашиглагддаг. Карбоксиметилцеллюлоз дээр пероксидазыг хроматографийн аргаар цэвэршүүлэхийн өмнө рН 4.4-5.0 натрийн ацетат буферийн эсрэг диализ хийдэг. Хөлдөөж хатаахын өмнө пероксидазын уусмалыг ионгүйжүүлсэн усны эсрэг диализ хийдэг. Зураг 1-д тунхууны үндэснээс пероксидазыг тусгаарлах бүдүүвч диаграммыг үзүүлэв. Тунхууны үндсийг урсгал усаар угааж, +25±10С-ийн температурт 140-160 цагийн турш соёолно. Соёолсон үндсийг буталж, 0.15 М натрийн хлоридын уусмалаар 12±2 цагийн турш тасралтгүй хутгаж, дараа нь центрифуг хийнэ. 16.7 ± 0.05 кг (45-48% ханалт) аммонийн сульфатыг супернатант-1 (Зураг 1) дээр тасралтгүй хутгах замаар нэмж, тунадасыг центрифугаар ялгаж, өөр 11 ,8±0.05 кг (85% ханалт) аммонийн уусмал хийнэ. сульфат, тунадасыг (Зураг 1) центрифугийн аргаар ялгаж, нэрмэл усаар 200±10 мл эцсийн эзэлхүүнтэй болтол уусгана. Центрифуг хийсний дараа пероксидаза агуулсан супернатантыг Sephadex G-100 дүүргэсэн багананд түрхэж, 0.15 М натрийн хлоридын уусмалаар 100 мл/цаг хурдтайгаар уусгаж, 20 мл-ийн фракцыг шүүрүүлэх явцад авна. Цуглуулсан фракцууд нь R Z =D 408 /D 275 хэмжигдэнэ. R Z нь 0.8-аас багагүй фракцуудыг нэгтгэж, натрийн ацетат буфер (рН 4.4 ± 0.2) (буфер-1) -ийн эсрэг диализ хийж, дараа нь давсгүйжүүлсэн пероксидазын уусмалыг карбоксиметил целлюлозоор дүүргэсэн баган дээр давхарлаж, буфер-1-ээр тэнцвэржүүлнэ. ба 5 мм-ийн шугаман градиент - 0.1 М ацетатын буфер (рН 4.4±0.2) (V=S-0.5 л, R-0.5 л) ялгаруулна. Уургийн фракцуудад R Z-ийн утгыг хэмждэг. R Z-ийн утга нь 2.5-аас багагүй фракцуудыг нэгтгэж калийн фосфатын буфер (рН 8.0 ± 0.1) (буфер-2) эсрэг диализ, диализжүүлсэн ферментийн уусмалыг DEAE-целлюлозоор дүүргэсэн баган дээр давхарлаж, ялгарсан буферт хийнэ. -2. R Z-ийн утга 3.0-аас багагүй фракцуудыг нэгтгэж, ионгүйжүүлсэн усны эсрэг диализ хийж, дараа нь халуунд тэсвэртэй ариутгасан колбонд хийж, шингэн азотоор хөлдөөж, эмийг бүрэн хуурай болтол хөлдөөж хатаана. Биологийн идэвхт бодисыг олж авах санал болгож буй аргын үндсэн ялгах шинж чанарууд нь: Sephadex G-100 дээр гель шүүлтүүрийг ашиглах нь пероксидазыг бага молекул жинтэй хольцоос бүрэн цэвэрлэх; Натрийн ацетат буферийн эсрэг диализ (рН 4.4-5.0), энэ нь пероксидазын уусмалыг давсгүйжүүлж, карбоксиметил целлюлоз дээр хроматографид бэлтгэх боломжийг олгодог; Калийн фосфатын буферийн эсрэг диализ (рН 8.0 ± 0.1), энэ нь пероксидазын уусмалыг DEAE-целлюлозыг хэрэглэхэд оновчтой рН бүхий оновчтой буферт шилжүүлэх боломжийг олгодог; DEAE-целлюлоз дээрх пероксидазын ион солилцооны хроматограф нь нэмэлт цэвэршүүлэх төдийгүй ферментийн уусмалын концентрацийг хангах арга юм. Тиймээс бид тунхууны үндсийг өндөр цэвэршилттэй, өвөрмөц идэвхжилтэй пероксидазын ферментийн үйлдвэрлэлээр боловсруулах боломжийг олгодог шинэ аргыг санал болгож байна. Санал болгож буй аргын хамгийн ойрын аналог ба прототипээс ялгаа нь дараах байдалтай байна. Нэхэмжлэгдсэн аргын хувьд тунхууны буталсан үндсийг 0.15±0.01 М натрийн хлоридын уусмалаар рН=4.4±0.2-аар гаргаж авснаар фермент нь уусмал руу хамгийн бүрэн шилжиж, ферментийн идэвхжил алдагддаггүй. Шинэ бүтээлийн аналог дээр [АНУ-ын Пат. RF 2130070, C12N 9/08, 05/10/1999] Цэвэршүүлсэн пероксидазыг (гомогенжүүлэхгүйгээр!) 1 цагийн турш хүнсний аскорбины хүчлийн 0.25% уусмалаар гаргаж авдаг бөгөөд энэ нь гомогенжүүлээгүй тул пероксидазын гарцад нөлөөлж болзошгүй юм. , тиймээс фермент нь уусмал руу бүрэн ордоггүй, харин олборлолт нь хүчиллэг нөхцөлд явагддаг бөгөөд энэ нь ферментийг хэсэгчлэн идэвхгүй болгоход хүргэдэг. Шинэ бүтээлийн эх загварт [A.S. Болгар 46675, C12N 9/08, 15.02.90] тунхууны үндсийг гомогенизатаас ферментийг усаар гаргаж авдаг бөгөөд энэ нь гомогенизатаас уусмал руу пероксидазын бага гарц үүсгэдэг. Шинэ бүтээлийн аналогиас ялгаатай нь пероксидазыг аммонийн сульфатаар 85-90% ханасан 2 удаа тунадасжуулах ба шинэ бүтээлийн прототипээс уурагуудыг аммонийн сульфатын давсаар 4 удаа тунадасжуулах замаар нэхэмжилсэн аргын хувьд: тогтворжуулагч уургийг 45-48%-ийн ханалтаар явуулж дараа нь пероксидаза 85 тунадасжина.% ханалт. Шинэ бүтээлийн аналог ба прототипийн хувьд концентрацийг хэт шүүлтүүрээр гүйцэтгэдэг бол шинэ бүтээлийн аналогид хэт шүүлтүүр нь аммонийн сульфатын пероксидазын тунадасжилтаас өмнө хийгддэг бөгөөд энэ нь хольцын уургийн хамт тунадасжих магадлал өндөр байдаг. , эцсийн бүтээгдэхүүний цэвэршилт багатай. Мэдэгдэж буй аргын хувьд технологийн процессын эцсийн шатанд пероксидаза нь DEAE-целлюлозын ион солилцооны сорбент дээр концентрацитай байдаг бөгөөд энэ нь ферментийг нэмэлт цэвэршүүлэхэд хүргэдэг. Нэхэмжлэгдсэн аргын дагуу гель шүүлтүүрийг Sephadex G-100 дээр 0.15 ± 0.01 М натрийн хлоридын уусмалаар (рН 4.4-5.0) уусмалаар хийдэг бөгөөд энэ нь пероксидазын уусмалын ногоон өнгөнөөс бүрэн ангижрах боломжийг олгодог. хлорофилл ба түүнтэй холбоотой нэгдлүүд, пероксидазын молекулын хэмжээ багатай бодисууд. Шинэ бүтээлийн аналогийн хувьд гель шүүлтүүрийг Sephadex G-25 дээр гүйцэтгэдэг бөгөөд энэ нь пероксидазын молекулын хэмжээ (40 кДа орчим) -ын хувьд хольцын тоосонцорыг хадгалах чадвараараа Sephadex G-100-ээс доогуур байдаг. . Шинэ бүтээлийн мөн чанарыг дараах жишээн дээр харуулав. Жишээ 1 Бүдүүн ханд бэлтгэх 50 кг тунхууны үндсийг урсгал усаар угааж, +25±1°С температурт 140-160 цагийн турш соёолуулна. Соёолсон үндсийг иртэй нэгэн төрлийн нэгэн төрлийн болгогч дээр буталж, 50 л 0.15-0.2 М натрийн хлоридын уусмал (рН 4.4±0.2) хийнэ. Суспензийг 12±2 цагийн турш байнга хутгах замаар гаргаж аваад дараа нь центрифуг хийнэ. Аммонийн сульфатыг 60 л эзэлхүүнтэй супернатант-1-д нэмж, тогтворжуулагчийн уурагуудыг 45-48% ханасан хүртэл тасралтгүй хутгана. (100% ханасан гэж давсны хэмжээг хэлнэ, түүнийг нэмэхэд уусмал ханасан, давс нэмбэл уусмал хэт ханаж, давс тунадас орно. Аммонийн сульфаттай уусмалын хувьд 100% ханалт нь нэмэлтийг хэлнэ. мөн 70,7 г аммонийн сульфатыг 100 мл нэрмэл усанд бүрэн уусгана.) Тунадас-1-ийг центрифугийн аргаар ялгана. Дараа нь үүссэн 55 л эзэлхүүнтэй хэт исэлдүүлэгч-2-ыг пероксидазын тунадасжуулахын тулд аммонийн сульфатаар 85% хүртэл ханаж, тунадас-2-ыг центрифуг ашиглан ялгана. Үүссэн тунадас-2-ыг ионгүйжүүлсэн усаар 200±10 мл эцсийн эзэлхүүнтэй болтол уусгаж, уусаагүй тунадас-3-ыг центрифугийн аргаар ялгана. Sephadex G-100 дээр гель хроматографи. Пероксидазын уусмалыг Sephadex G-100 дүүргэсэн 1 л баганад хэрэглэнэ. Уусмалыг 0.15-0.2 М натрийн хлоридын уусмалаар (рН 4.4-5.0) 100 мл / цаг хурдтайгаар хийж, 20 мл-ийн фракцыг шингээх явцад авна. Цуглуулсан фракцууд нь R Z =D 408 /D 275 хэмжигдэнэ. R Z нь 0.8-аас багагүй бутархайг нэгтгэдэг. Цуглуулгад 5 л 5±0.1 мм натрийн ацетат буфер (рН 4.4-5.0) (буфер-1) болон хосолсон пероксидазын фракц бүхий диализийн уут хийнэ. Диализийг 24 цагийн турш тогтмол хутгах замаар хийж, цуглуулга дахь буферийг гурван удаа өөрчилдөг. Давсгүйжүүлсэн ферментийн уусмалыг карбоксиметил целлюлозоор дүүргэсэн 1 литрийн багтаамжтай баганад давхарлаж, буфер-1-ээр тэнцвэржүүлнэ. Элюцийг 5 мм-0.1 М ацетат буфер (рН 4.4±0.2) (V=S-0.5 л, R-0.5 л) шугаман градиентаар 50 мл/ц хурдтайгаар явуулна. Уургийн фракцуудад R Z-ийн утгыг хэмждэг. R Z утга нь 2.5-аас багагүй бутархайг нэгтгэдэг. Цуглуулгад 5 л 20 ± 0.1 мМ калийн фосфатын буфер (рН 8.0 ± 0.1) (буфер-2) болон ферментийн фракцуудыг нэгтгэсэн диализийн уут хийнэ. Диализийг ижил аргаар хийдэг. DEAE-целлюлоз дээр баяжуулах хроматографи. 8.0 ± 0.1 рН-тэй ферментийн уусмалыг DEAE-целлюлозоор дүүргэсэн 300 мл-ийн баганад давхаргаар хийнэ. Элюцийг буфер-2-оор 50 мл/цаг хурдтайгаар явуулна. R Z утга нь 3.0-аас багагүй бутархайг нэгтгэдэг. Коллекторт 5 л ионгүйжүүлсэн ус, пероксидазын уусмал бүхий диализийн уут хийнэ. Диализийг ижил аргаар хийдэг. Хөлдөөж хатаах. Пероксидазын уусмалыг халуунд тэсвэртэй ариутгасан колбонд хийж, шингэн азотоор хөлдөөж, эмийг бүрэн хуурай болтол хөлдөөж хатаана. Жишээ 2 (харьцуулсан) Энэ жишээнд прототипийн дагуу пероксидазыг авах нөхцөлийг хангасан боловч пероксидазын үндсэн үзүүлэлтүүдийг сайжруулахын тулд прототипт байгаа хоёр үе шатыг өөрчилсөн, тухайлбал: пероксидазын уусмалын хэт шүүлтүүрийн концентрацийн хувьд хөндий бүхий хоёр төрлийн багана. нэг төрлийн утас хэрэглэдэг прототипээс ялгаатай нь эслэгийг ашигладаг бөгөөд аммонийн сульфатын давстай уургийн бутархай хуваагдал (мэдэгдэж буй аргын адил). Барзгар хандыг олж авах. 50 кг тунхууны үндсийг урсгал усаар угааж, массын 1/3-ийг аскорбины хүчлийн 0.25% -ийн 33.5 л уусмалаар цэвэрлэж, авсан цэвэрлэгээг 1 цаг байлгаад пероксидазын ферментийг гаргаж авна. . Дараа нь хандыг урсгалын центрифугт центрифуг хийж, ферментийн "боловсорч гүйцэхэд" зориулж 24 цагийн турш өсгөвөрлөнө. Анхдагч цэвэршүүлэх ба концентраци. Олж авсан ханданд 1.7 кг (жингийн 5%) натрийн сульфит нэмж, хандыг 60 кДа-ийн нүхний хэмжээтэй шүүлтүүр бүхий багана бүхий UPV-6 хөндий полимер шилэн төхөөрөмжид хэт шүүлтүүрээр баяжуулж, анхан шатны цэвэршүүлнэ. ба 5 кДа. Суурилуулалтын бүдүүвч диаграммыг 2-р зурагт үзүүлсэн бөгөөд энэ нь төвөөс зугтах насос 1-ийг харуулж байна; урьдчилсан шүүлтүүр 2; 60 кДа 3 нүхний хэмжээтэй утас бүхий багана; 5 кДа 4 нүхний хэмжээтэй утас бүхий багана; пероксидазын шүүлтүүр 5; пероксидазын 6-ийн төвлөрсөн уусмал; бага молекул жинтэй уураг агуулсан шүүж 7. Аммонийн сульфатын давстай уургийн хуваагдал. Аммонийн сульфатыг 6 л эзэлхүүнтэй баяжмалд нэмж, тогтворжуулагчийн уурагуудыг 45-48% ханасан хүртэл тасралтгүй хутгана. Тунадасыг центрифугийн аргаар ялгана. Дараа нь 5.7 л эзэлхүүнтэй хэт исэлдүүлэгч пероксидазын тунадасжилтыг аммонийн сульфатаар 85% хүртэл ханаж, тунадасыг центрифугаар ялгаж, бид нэрмэл усаар 200±10 мл эцсийн эзэлхүүн хүртэл уусгаж, уусаагүй тунадасыг авна. центрифугийн аргаар тусгаарлана. Sephadex G-25 ба G-50 дээр гель хроматографи. Пероксидазын цаашдын цэвэршүүлэлтийг Sephadex G-25-аар дүүргэсэн гель шүүлтүүрийн багана дээр хийж, нэрмэл усаар тэнцвэржүүлнэ. Пероксидазын уусмалыг баганад түрхэж, уусмалыг бид нэрмэл усаар хийнэ. R Z нь 0.2-оос багагүй бутархайг цуглуул. Цуглуулсан фракцуудад аммонийн сульфатыг 90% ханасан хүртэл нэмж, давсыг бүрэн уусгах хүртэл хутгаж, центрифуг хийнэ. Тунадасыг нэрмэл усаар 3 дахин их хэмжээгээр уусгаж, Sephadex G-50 дүүргэсэн гель шүүлтүүрийн баганад түрхэж, бид нэрмэл усаар тэнцвэржүүлнэ. Цэвэрлэх ажлыг бид нэрмэл усаар хийдэг. R Z нь 0.6-аас багагүй бутархайг цуглуул. 50% цууны хүчилтэй бол пероксидазын фракцуудын рН-ийг 4.4 болгож тохируулна. Карбоксиметил целлюлозын хроматографи. Пероксидазын фракцуудыг 5 мМ рН 4.4 ацетат буферээр урьдчилан тэнцвэржүүлсэн карбоксиметил целлюлозоор дүүргэсэн 1 литрийн багтаамжтай багана дээр давхарлана. Элюцийг 5 мм-0.15 М ацетат буфер (рН 4.4±0.2) (V=S-0.5 л, R-0.5 л) шугаман градиентаар 1 цагийн турш явуулна. Уургийн фракцуудад R Z-ийн утгыг хэмждэг. R Z-ийн утга нь 2.7-оос багагүй фракцуудыг нэгтгэж, аммиак нэмж рН 5.0 болгон тохируулж, хөлдөөж хатаана. Жишээ 1 ба 2-ын харьцуулсан өгөгдлийг хүснэгтэд үзүүлэв.
Тиймээс жишээнүүд болон хүснэгтээс харахад тунхууны үндэснээс пероксидазыг гаргаж авах арга (жишээ 1) нь энэхүү ферментийг салшгүй хэсэг болгон ашиглахад хангалттай цэвэршилт, идэвхтэй үйл ажиллагаатай, өндөр ургац бүхий пероксидазыг авах боломжтой болгодог. ферментийн дархлаа судлалын коньюгатуудын . Прототипийн нөхцөлд (жишээ 2) гүйцэтгэлийг сайжруулдаг хоёр үе шатыг сайжруулсан ч зорилтот пероксидазын гарц, өвөрмөц идэвхжил, цэвэршилт нь санал болгож буй аргынхаас доогуур байна. Энэ аргыг тунхууны үндэснээс пероксидазын үйлдвэрлэлийн үйлдвэрлэлд ашиглаж болно. Нэхэмжлэх1. Соёолсон тунхууны үндсийг нунтаглах, нэгэн төрлийн болгох, тунхууны үндэсийн гомогенатыг гаргаж авах, тогтворжуулагчийн уураг ялгах, пероксидазыг аммонийн сульфатын давсаар тунадасжуулах, Сефадекс дээр пероксидазын уусмалыг гельээр шүүж, хроматжуулах арга. карбоксиметил целлюлоз дээр цэвэршүүлэх, зорилтот пероксидазыг хөлдөөж хатаах, тунхууны буталсан үндсийг 0.15±0.01 М натрийн хлоридын уусмалаар гаргаж авахаас ялгаатай; Пероксидазын уусмалын гель шүүлтүүрийг Sephadex G-100 дээр хийж, диализийг рН 4.4-5.0 натрийн ацетат буфер, рН 8.0±0.1 калийн фосфатын буферийн эсрэг диализ, DEAE-целлюлозын уусмалаар нэмэлт цэвэршүүлэх концентрацийг хийнэ. ижил буфертэй, дараа нь ионгүйжүүлсэн усны эсрэг диализ. 2. Тунхууны буталсан үндсийг рН 4,4 ± 0,2 0,15 ± 0,01 М натрийн хлоридын уусмалаар гаргаж авдгаараа онцлогтой. 3. 1-р зүйлд заасан арга нь аммонийн сульфатын давстай уургийн тунадасжилтыг хоёр удаа ашигладаг: тогтворжуулагчийн уургийг ялгахад 45-48% ханалт, пероксидазыг тунадасжуулахад 85-90% ханалт хэрэглэнэ. 4. Гель шүүлтүүрийг Sephadex G-100 дээр рН 4,4-5,0-ийн 0,15-0,2 М натрийн хлоридын уусмалаар шүүж байгаагаар тодорхойлогддог 1-р зүйлийн дагуу арга. 5. Карбоксиметил целлюлоз дээр пероксидазын хроматографийн аргаар цэвэршүүлэхийн өмнө рН 4.4-5.0 натрийн ацетатын буферийн эсрэг диализ хийх замаар тодорхойлогддог 1-р зүйлд заасны дагуу арга. 6. Нэхэмжлэлийн 1-д заасны дагуу арга бөгөөд энэ нь хөлдөөж хатаахын өмнө пероксидазын уусмалыг ионгүйжүүлсэн усны эсрэг диализ хийх замаар тодорхойлогддог. "хакердсан" диссертаци Би сэдэв хайх шаардлагагүй байсан. Түүний бүх хүүхэд нас тунхуутай холбоотой байв. Тосгоны эмээ нар эм тариагүй байсан. Эрүүл мэндийг байгалийн бэлгээр засч залруулсан. Цас хайлж дуусмагц тэд эдгээх үндэс ухахаар цэцэрлэгт очив. Дипломын ажлаа өөрөө бичиж, "хакердсан". Цөцгийг нь мөн чанарыг нь ил гаргахгүй долоочихсон юм шиг санагдлаа. Хөдөө аж ахуйн технологийн хувьд би нэг чухал зүйлийг орхигдуулсан гэж эрдэмтэн түүний ер бусын үйлдлийг тайлбарлав. Үнэний хойноос хөөцөлдөж нэг иймэрхүү юм бодсон. Тунхууны эх орон болох Орос улсад 60 жилийн турш үүнийг бараг хассан. 500 гаруй сортоос 2-3 нь л үлдсэн. Мөн 200 жилийн өмнө гарч ирсэн Европт өнөөдөр 2.5 мянган сорт байдаг. 1900 онд Хөдөө аж ахуйн яамны санаачилгаар авчирсан Америкт аль хэдийн 3.5 мянга байна. Мөн түүнийг үржүүлэх ажил үргэлжилж байна. Юуны төлөө? Тунхууны эм нь хорт хавдрыг эмчилдэг гэсэн анхны хагас далд мэдээлэл Израиль улсаас гадагш гарчээ. Дараа нь Америк, Европ "гэрэлдэв". Шүлхий өвчний хүрээлэн, Микробиологийн хүрээлэнгийн эрдэмтэдэд хандсан. Тэд эмийн томъёог тайлсан - пероксидаз. Нэг тонн тунхууны нухашаас ердөө хагас грамм л авчээ. Тэр түүнийг "мэдэрч", харах гэсэн юм шиг бухимдаж эхлэв, - гэж Емелин хэлэв. Энэ хэрэгт скаутуудыг татан оролцуулсан нь зөв байсан. Тэгээд ийм зүйл болсон. Тэдний тусламжтайгаар бид манай газрын тосны худалдаа эрхэлдэг Францын компанийг олсон. Дарсан. Тэд пероксидаза үйлдвэрлэх үйлдвэр барина гэж амласан. Гэхдээ түүнийг үйлдвэрлэх технологи нь цоож, түлхүүрийн дор хэвээр байв. Талбайгаас хамгийн үнэ цэнэтэй зүйл нь алга болох цаг гарахгүйн тулд улсын фермийн тунхууны үрийг Франц дахь лабораторид шинжлүүлэхээр илгээв. Шинжилгээ хойшлогддог. Хоёр дахь удаагаа явуулсан. Манай тунхуунд пероксидазын агууламж импортынхоос 50 дахин их байдаг нь тогтоогдсон. Өөрөөр хэлбэл, нэг тонноос бид 0.5 грамм биш, харин 25 грамм авч болно. "Чи дор хаяж 30 мянган төрлийн тунхууны сорт үржүүлэх болно, гэхдээ Орост байгаа шигээ хэзээ ч авахгүй. Энэ бол бидний өмч" гэж Емелин ялав.
Мөн тунхууны тухай диссертаци хамгаалсан хэвээр байна. Шинжлэх ухааны зөвлөхөөр Балашиха дахь Хөдөө аж ахуйн дээд сургуулийн профессор Иван Владимирович Мичуриний шавь Марина Владимировна Алексеева ажилласан. Өрсөлдөгчид бол хүнсний ногоо тариалангийн нэрт зүтгэлтнүүд бөгөөд Владимирын хойд нутгийн зарим нэг тариачин ийм сэдвээр эргэлзсэн гэдэгт бараг итгэдэггүй байв. Хамгаалалтын үр дүн нь тунхууны үйлдвэрийн тариалалтын талаархи гарын авлага байв. Үүний зэрэгцээ Владимир хотын шүлхий, вирус судлалын хоёр хүрээлэнгийн эрдэмтэд Емелин фермээсээ түүхий эдийг нийлүүлж, дотоодын пероксидаз үйлдвэрлэх технологийг бүтээжээ. Дэлхийн зах зээл дээр нэг грамм нь 7000 ам.долларт хүрсэн бодисыг үйлдвэрийн аргаар гаргахын ирмэг дээр байсан. Хэрэв 100 жилийн өмнө Суздальчууд Германтай маш ашигтай худалдаа хийж, тэнд жилдээ 40 вагон тунхууны үндэс илгээдэг байсан бол энэ технологи нь тус улсад алтны уурхай болж чадна гэж Юрий Анатольевич итгэлтэй байна. Гэвч перестройка эхэлж, улс оронд тамд орох цаг байсангүй. Шинжлэх ухааны судалгааг хязгаарлаж, үйлдвэрлэлийн тариалалтын цар хүрээг тухайн үед Емелин захирал байсан Ставровскийн фермд нэг талбай болгон бууруулжээ. Цэцэрлэгт могой Горынич Эсвэл тэд өөрсдийгөө нэг талбараар хязгаарласан нь сайн хэрэг болов уу? -Түүнтэй тулалдахад ямар хэцүү байдгийг санаж, чангаар бодож байна. Цэцэрлэгт тунхууны авах шаардлагатай байна, та үүнийг хэзээ ч гаргаж ирэхгүй. Алдарт зураач, одоо захирагч Михаил Евдокимовын түүх санаанд орж, тунхуунаас хэрхэн ангижрахыг оролдсон боловч Тол хүртэл тус болсонгүй. Тэгээд яах вэ? Чи түүнтэй тулалдах шаардлагагүй. Үүнийг зөвхөн номхруулж болно. Тунхуу нь сонгино, төмс болон бусад цэцэрлэгийн ургацтай сайн зохицож, хортон шавьжнаас хамгаалдаг. Үүнийг бидний өвөг дээдэс эрт дээр үеэс тэмдэглэж ирсэн. Тэр ч байтугай 500 жилийн өмнө тэд: тунхуугүй цэцэрлэг бол хоньчингүй сүрэгтэй адил юм. Цэцэрлэгжүүлэлт эхлэхэд юуны түрүүнд тунхууны ургах газрыг тодорхойлсон. Суздаль нутагт тунхууны болон сонгины тариалалт байсан нь тохиолдлын хэрэг биш юм. Эхлээд тэд сонгино устгаж, дараа нь тунхууны. Төмстэй адилхан. Есдүгээр сард тэд ухаж, 10-р сард тунхуун гарч ирэв. Бид улаан буудай, хөх тариа тарьсан. Тэд нэг га-гаас 50-60 центнер ургац авсан, - гэж Емелин хэлэв. Тунхууны талаар судалж байхдаа Емелин "археологийн" малтлагад ирэв. Өссөн нутагтаа газар шигшиж, үндсийг нь тоолсон. Тэгээд тэр тунхууны хоёр төрөл байдаг гэж дүгнэсэн. 15 метрийн гүнд үндэслэж, ээжийгээ дуудсан. Ургац хураалтын дараа үлдсэн жижиг үндэснээс хөрсний дээд давхаргад үүсдэг - морь. Жинхэнэ тунхууны - эхийн. Тэрээр Адамын газар гэж нэрлэгддэг газрын хэвлийн давхаргаас энд байхгүй болсон шим тэжээл, элементүүдийг гаргаж авдаг. Гэхдээ тунхууны хогийн ургамал нь эхийн хувьд ч бас болно. Жилд 60-70 см-ээр газарт ордог тул цаг хугацаа өг. Адууны улаан лууван "халдвар" авах магадлал өндөр гэсэн үг үү? - Би Емелинд санаа зовж байгаагаа илэрхийлж байна. Үүний хариуд тэрээр шинэ аргумент дэвшүүлэв: Тунхуу нь өөрөө өөрийгөө зохицуулах соёл юм. Нэг хоосон торхонд хоёр торх ус асгаж чадахгүйн адил нэг газар дээр байх ёстой хэмжээнээсээ илүү ургахгүй. Тэгээд хэдэн төгрөг төлөх вэ? Түүний ургац нэг га-аас дээд тал нь 4-5 тонн үндэс болдог. Бүтээмжийн хувьд ийм огцом хязгаарлалт нь тунхууны бусад үр тарианаас ялгардаг. Үүнийг судлахад 30 гаруй жил зүтгэсэн хүний хувьд бүрэн хариуцлагатайгаар хэлж байна. Гэхдээ хэрэв тэр суурьшсан бол олон зууны турш. Тунхуу ургадаг газар 100 байтугай 300 жилийн дараа ч төрнө. Тэгэхээр Михаил Евдокимовын зөв бөгөөд зөвхөн цөмийн бөмбөг л түүнийг аврах болов уу? - Би бүх цэцэрлэгчдийн нэрийн өмнөөс маргааныг үргэлжлүүлж байна. Та алим түүсний дараа алимны мод огтлохгүй гэж үү? Тэр ирэх жил ургац өгөх болно. Тамд ч мөн адил. Тэр сард нь ухдаг байсан, нэрэнд нь "р" үсэг байдаг: 9, 10, 11-р сар (Үлдсэн хугацаанд тэр хурц, гичний үнэр байхгүй) ... Дээд талыг нь хайчилж ав. чадах чинээгээрээ, дараа улирал гэхэд энэ газар улам бүр өсөх болно. Орост тэд нэг тайрсан толгойн оронд гурван толгой ургадаг Могой Горыничын тухай ярихдаа тунхууны гэсэн үг байсан байх" гэж Емелин тайлбарлав. Үндэсийг нь хар SPK "Ставровский" бол Оросын тунхууны цэцэглэдэг талбайг харж болох ховор газруудын нэг юм. Тэгээд зөгий түүн дээгүүр олон хоног нисдэг гэж ярьдаг. Захирал новшийн бал идэх шаардлагагүй байсан нь үнэн. Гэхдээ тэр цэцэг өгсөн. Тэд ер бусын үзэсгэлэнтэй гэж Емелин үзэж байна. Мөн тунхууны үр үүсдэг. Харин тэднийг тарьвал юу ч гарахгүй. Тунхууны үржлийг зөвхөн ургамлын үндэсээр хийдэг. Яагаад? Йемелин хариулт олсонгүй. Гэхдээ нөгөө талаас энэ нь эрдэмтэнд эртний гарал үүслийн талаар бодох боломжийг олгодог мөчүүдийн нэг юм. Хамгийн хүчтэй сүйрлийг даван туулж чадсан ургамал ийм байдлаар дасан зохицож, амьд үлдсэн бололтой. Энэ нь хүнсний ногоо, эмийн ургамал эсвэл амтлагч уу гэсэн тодорхой хариулт алга байна. Төрөл зүйлийн тодорхой хил хязгаар байхгүй байгаа нь тунхууны Атлантисын элч гэсэн таамаглалыг баталж байна гэж Емелиний үзэж байна. Олон соёлын гарал үүсэл эрт дээр үеэс мэдэгдэж байсан. Тунхуу хаанаас ирсэн бэ, шинжлэх ухаанд маш их будлиан байдаг. Тутанхамуны үед египетчүүд хаа нэгтээ варваруудаас алтаар үнэлэгдэх үндсийг нь авсан гэж олон эх сурвалжаас уншсан. Гэхдээ энэ бол тунхуун гэдэгт би баттай итгэлгүй байна "гэж Емелин нуудаггүй. Гэвч судалгааныхаа сэдвийг бурханчлан сахиж, тэрээр дадлагажигч хэвээр байна. Владимир, Ярославль мужуудын 250 орчим хүнсний ногооны цэцэрлэгт үржлийн материал хайхаар аялж байхдаа тэрээр "Толпуховский" (фермийнхээ төв эдлэнгийн нэрээр) шинэ сортын тунхууны сортыг боловсруулж, эгц эрэг дээр тарьсан. Колокша гол. Дараачийн соёл иргэншил хүртэл. Эмелин өөрөө тунхууны эмийг эм болгон ашигладаг. Гэхдээ биднээс ялгаатай нь боловсролгүй хүмүүс нухсан тунхууны ашигтай шинж чанар нь зөвхөн 7 хоног үргэлжилдэг гэдгийг харгалзан үздэг. Дэлгүүрийн лангуун дээр хэдэн сарын турш "унждаг" тунхууны маханд, манай агуулахуудад ямар ч хамаагүй! - гэж эрдэмтэн хэлэв. Юу хийх вэ? Намрын улиралд 5-6 кг газар ухаж, зооринд хийж, шороо цацаж, хэвтүүлсэн. 250 грамм саванд хангалттай байхаар тэндээс бага зэрэг гар. Жилд хоёр удаа ууж болно: өвөл, хаврын эхэн үед. Өвлийн улиралд - зоорьноос. Мөн хавар, дэлхий бага зэрэг гэсгээх үед та навч 5 см хүртэл ургах хүртэл аюулгүй ухаж болно. Улаан өндөгний баяраар шинэ тунхууны хамт гахай иддэг өвөг дээдэс маань ч мөн адил. Эмелинд итгэж болно. Саяхан тэрбээр “Цэцэрлэгтээ новш”, “Эмчээ новш”, “Ширээн дээрээ новш” гэсэн гурван ном дараалан гаргасан. Одоо тэр "Гренолечебник" хэвлэхэд бэлтгэж байна. Мөн тэрээр сорох нь муу гэсэн хэвшмэл ойлголтыг няцаасаар байна. Эсвэл үнэхээр амьдрал нь үнэ цэнэгүй гэж хэлэхэд тэд зөвхөн Оросын тунхууны хувь заяаг хэлдэг болов уу? Ойролцоогоор 44,173.9 Да, энэ нь гликопротейн бөгөөд шошголох молекулд бэхлэгдэх дөрвөн лизин амин хүчлийн үлдэгдэлтэй. Тунхууны пероксидазын үйл ажиллагааны бүтээгдэхүүн нь илрүүлэх, хэмжихэд тохиромжтой өнгөт эсвэл гэрэлтдэг нэгдэл юм. HRP нь ихэвчлэн зарим молекулуудыг илрүүлэхэд коньюгатуудын нэг хэсэг болгон ашигладаг. Жишээ нь, Western blotting тохиолдолд HRP коньюгатуудыг зорилтот уураг эсвэл молекулуудын эсрэг эсрэгбиетэй хамт хэрэглэдэг; Энэ тохиолдолд эсрэгбие нь өгөгдсөн зорилтод өвөрмөц шинж чанартай байдаг бөгөөд HRP нь илрүүлэх дохио үүсгэдэг. . Тунхууны пероксидазыг мөн ELISA болон иммуногистохимийн шинжилгээнд ашигладаг. Тунхууны пероксидаза нь харьцангуй жижиг, харьцангуй тогтвортой, шүлтлэг фосфатаза гэх мэт хувилбаруудаас хямд байдаг тул олон төрлийн хэрэглээнд тохиромжтой фермент юм. HRP b тухайнэгж хугацаанд илүү олон тооны эргэлт хийдэг тул харьцангуй богино хугацаанд хангалттай хүчтэй дохиог хөгжүүлэх боломжийг олгодог. Тунхууны пероксидаза нь чөлөөт хэлбэрээр эсвэл бусад молекулуудтай коньюгат хэлбэрээр дүрслэхэд субстрат байхыг шаарддаг. HRP нь устөрөгчийн хэт ислийн дэргэд субстратыг исэлдүүлж, спектрофотометрийн аргаар илрүүлэх боломжтой бүтээгдэхүүн үүсгэдэг. Худалдааны хувьд тунхууны пероксидазын субстрат 3,3',5,5'-тетраметилбензидин TMB) ба 3.3"-диаминобензидин (eng. DAB) исэлдэх үед өнгөт бүтээгдэхүүн өгдөг ба химилюминесцент бодисууд SuperSignal, ECL нь HRP-ийн нөлөөн дор илрэх гэрлийн эх үүсвэр болдог. Химилюминесценцийг сайжруулах (ECL)Тунхууны пероксидаза нь хэд хэдэн завсрын бүтээгдэхүүнээр дамжуулан люминолыг 3-аминофталат болгон исэлдүүлдэг. Энэ урвал нь 428 нм долгионы урттай бага эрчимтэй гэрэлтэлт дагалддаг. Тодорхой бодис байгаа тохиолдолд гэрэлтэлтийг мянга дахин нэмэгдүүлэх боломжтой. Гэрэлтэлтийг сайжруулах үзэгдлийг химилюминесценцийг сайжруулах гэж нэрлэдэг. сайжруулсан химилюминесценц, ECL ). Хамгийн үр дүнтэй сайжруулагч нь фенолын деривативууд, жишээлбэл, p-иодофенол юм. ECL нь Southern blotting дахь 0.5 пикограмм нуклейн хүчлийг илрүүлэх боломжийг олгодог. ТэмдэглэлГадаад холбоосуудВикимедиа сан. 2010 он. Бусад толь бичгүүдээс "тунхууны пероксидаза" гэж юу болохыг хараарай.тунхууны пероксидаза- — Биотехнологийн сэдэв EN тунхууны пероксидаза ... Техникийн орчуулагчийн гарын авлага - [[Зураг:|px|Тироопероксидазын химийн бүтэц]] бамбай булчирхайн пероксидазын тэмдэг(үүд) TPO Entrez ... Wikipedia SDS-ийн дэргэд градиент полиакриламидын гель электрофорезоор тусгаарлагдсан уургийн Western blot шинжилгээ. Western blotting (protein immunoblot, English Western blot) нь ... ... Википедиа тодорхойлоход ашигладаг аналитик арга юм. Western blotting (Western blot, protein immunoblot, English Western blot) нь дээжинд тодорхой уураг тодорхойлоход ашигладаг аналитик арга юм. Эхний шатанд полиакриламид гель дэх уургийн электрофорезыг ... ... Википедиа ашигладаг. - (Англи хэл Peroxiredoxins, Prxs, EC 1.11.1.15) антиоксидант ферментийн өргөн тархсан гэр бүл. Хөхтөн амьтдын хувьд энэ бүлгийн ферментүүд нь эсийн дохиололд оролцдог цитокины өдөөгдсөн хэт ислийн түвшинг хянадаг. … … Википедиа Глутатион пероксидаза (GP) нь бие махбодийг исэлдэлтийн гэмтлээс хамгаалдаг ферментийн гэр бүл юм. Эмч нар липидийн пероксидаз ба устөрөгчийн хэт ислийн задралыг хурдасгадаг. Глутатион пероксидазын янз бүрийн хэлбэрийг кодлодог хэд хэдэн генүүд мэдэгдэж байгаа бөгөөд тэдгээр нь ялгаатай ... ... Википедиа Пероксидаза нь ургамал, микроб, амьтны эд эсэд байдаг хамгийн түгээмэл ферментүүдийн нэг юм. Энэхүү фермент нь олон төрлийн органик нэгдлүүдийг устөрөгчийн хэт исэлтэй исэлдэж, амьд организмаас ялгардаг хорт хэт ислийг үүсгэдэг. Пероксидаза нь хоёр домайн бөмбөрцөг үүсгэдэг полипептидийн гинж ба домайнуудын хооронд байрлах төмрийн атом бүхий гем протезийн бүлгээс бүрддэг гликопротейн юм. Тунхууны пероксидазын С-ийн бүтцийн бусад ургамлын пероксидазуудаас ялгарах гол онцлог нь фенилаланин (F) ба гликиний G-ийн үлдэгдэл хооронд 34 амин хүчлийн үлдэгдэл байдаг (Зураг 1). Субстратад нэвтрэх сувгийн нэг хэсэг болох энэ бүс нь бусад ангиллын пероксидазуудад байдаггүй бөгөөд үүнээс гадна энэ нь өөрийн ангилалд ч ялгаатай байдаг. Илүү том F-G оруулгатай (7 амин хүчлийн үлдэгдэлээр) тодорхойлогддог тунхууны пероксидаза С-ийн хувьд анхилуун үнэрт донор молекулуудтай шууд харьцах чадвартай гол үлдэгдэл тогтоогдсон. Тунхууны пероксидаза изоэнзим С нь гемийн ил захад ойртохыг хамгаалдаг Phe142, Phe68, Phe179 гэсэн гурван захын үлдэгдэлтэй цагирагтай байдгаараа онцлог юм. Энэхүү үнэрт бүс нь пероксидазын үнэрт субстратыг холбох чадварт чухал үүрэгтэй. Цагаан будаа. 1. Тунхууны пероксидазын орон зайн бүтэц С. Пероксидазын катализын үйл явцын нэг онцлог нь спектрофотометрээр ялгагдах олон тооны цогцолбор үүсэх явдал юм. Пероксидазын мөчлөгийн хялбаршуулсан диаграмм нь дараах байдалтай байна. E + H 2 O 2 → E 1; k 1 E 1 + AH 2 → E 2 + AH; k2 E 2 + AH 2 → E + AH; к 3 Энд E, E 1, E 2 - тус тусын анхны пероксидаз ба түүний исэлдсэн хэлбэрүүд; AN 2, AN - тус тусын анхны субстрат ба түүний исэлдсэн хэлбэр. Устөрөгчийн хэт ислийн ферментийн үйлчлэлээр үүссэн эхний шатны бүтээгдэхүүн болох E 1 нь исэлдэлтийн хоёр эквивалент агуулсан исэлдсэн пероксидазын дериватив юм. E 1-д төмрийн албан ёсны цэнэг +4 байна. E 1 молекул дахь нэмэлт исэлдэлтийн эквивалент нь порфирин пероксидазын макроцикл эсвэл ферментийн функциональ бүлгүүдийн аль нэгэнд байршдаг. Донорын субстратууд нь E 1 нэгдлүүдийг уугуул фермент рүү шууд (хоёр электроны бууралт) эсвэл E 2 завсрын бодис (нэг электроны бууралт) үүсгэх замаар бууруулж чаддаг. Пероксидазын исэлдэлтийн урвалд устөрөгчийн хэт исэлээс гадна органик субстратууд, тухайлбал алкил гидропероксид, пероксибензолын хүчил гэх мэт исэлдүүлэгч бодис (эхний субстрат) болж чаддаг.Пероксидаза нь хоёр дахь субстраттай харьцуулахад өвөрмөц чанар багатай байдаг. , хэд хэдэн электрон хандивлагч нэгдлүүдийг пероксидазын субстрат болгон ашиглаж, аналитик биохими, клиник анагаах ухааны аргуудыг илрүүлэх системийг үндэс болгон ашиглаж болно. |
Алдартай:
Шинэ
- Бүх ашигтай шинж чанарыг хадгалахын тулд сарнай хонго хэрхэн зөв нэрэх вэ
- Арган тосыг хэрхэн хэрэглэх талаар
- Зууханд нугасны буланг хэр их хоол хийх вэ
- Удаан агшаагчтай энгийн борщ
- Бялуу Прага - хоол бэлтгэх
- Kefir дээр амттай мөөгөнцөргүй зуурмаг
- Чидун жимсний тосоор наранцэцгийн тосыг хаана хадгалах вэ
- Хоёрдогч дэвшилтийн арга Зурхайн дэвшил
- Үйл үг залгах дүрэм
- Үйл үг залгах дүрэм
